Innováció, a tudomány és a gyakorlat egysége az ezredforduló agráriumában [antikvár]

Innováció, a tudomány és a gyakorlat egysége az ezredforduló agráriumában, DebrecenARCHEOGENETIKAI VIZSGÁLATOK KÖZÉPKORI NÖVENYMAGVAKBANGyulai Gábor', Juhász Attila^ Kiss József, Cserháti Mátyás'\ Gyulai Ferenc , Holly László^ Heszky László'' Szent István Ecetem, MKK, Genetika és Növénynemesítés Tanszék, Gödöllő ELTE, TTK, Mikorbiológia Tanszék, Budapest A grobotanikai Központ, TápiószeleBevezetés és célkitűzésA növénygenetika és biotechnológia különleges területe az archeogenetika tudománya, melynek keretén belül évszázadostól évmillió éves maradványokból sejtek, illetve DNS állomány menthető és elemezhető (Páabo et al. 1989, Cherfas 1989, Poinarés Hess 1989).Az egysejt-eredetű növényregeneráció segítségével, steril körülmények között, egyetlen sejtből is ezerszámra szaporítható fel az adott növény az indukált sarjszövet képződésen keresztüli kalluszindukciót és redifferenciációt követően (Heszky et al. 1989, Gyulai G. et al. 1995).Jó megtartású régészeti mintákban, amennyiben a sejtmagi DNS-állomány nem, vagy csak részlegesen sérült, akkor a növények genetikai állománya visszanyerhető. Az adatokból a faj evolúció iránya meghatározható, sőt az elveszettnek hitt hasznos gének klónozhatók.A Mátyás király korabeli Budavári ásatásokból (XV. század) jó megtartású növénymagvak kerültek elő, melyeket növényregenerációs-, és i3nS-mentési kísérletbe vontunk.Anyag és MódszerMagminták. A molekuláris genetikai vizsgálatokhoz a DNS kivonásához alkalmas legépebb magokat (köles, sárgadinnye, görögdinnye) választottuk ki. Ezeket felületi fertőtlenítés után agarral szilárdított, növekedésserkentő hormonokkal kiegészített táptalajon (Gyulai et al. 1995) teszteltük, részben a túlélő sejt-eredetű sarjszövet (kallusz) képződésre és növényregenerálásra, részben pedig a DNS-kivonáshoz szükséges steril, szennyező-DNS-mentes magok kiválogatására.A növényi anyag genetikai összehasonlító vizsgálatát PCR-alapú módszerekkel (Williams et al. 1990, Gyulai G. et al. 2000) elemeztünk.DNS izolálás. 0,2 - 0,4 g köles, sárgadinnye és görögdinnye magot porítottunk el cseppfolyós nitrogénben, majd 240 |a,l extrakciós (EB) pufferben szuszpendáltuk (EB: 10 mM Tris pH: 8,0, 50 mM EDTA, 500 mM NaCl), majd 60SDS hozzáadása után 65 °C-on 20 perciginkubáltuk. Ezután 160 ^,1 5 M káliumacetát (pH: 5,3) hozzáadásával a mintákat 0°C-on tartottuk 20 percig. Centrifugálás után (13 000 rpm, 4 °C, 20 perc) a DNS-t a felülúszóból 0,lx térfogatú Na-acetáttal (pH: 5,2) és kétszeres térfogat 96 %-os etanollal csaptuk ki. A csapadékot 70 %-os etanollal mostuk, és TE pufferben oldottuk fel (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Ezt követően mintákat 4